临床检验
第八十一章 临床检验 第一节 临床血液学检验 血常规检查 【 标 本 】 抗凝静脉血（有些仪器也可用末梢血）。 【 方 法 】 血液细胞自动分析仪测定法。 【 试 剂 】 血液细胞自动分析仪配套试剂。 【 操 作 】 详见自己实验室血液细胞自动分析仪使用手册。 【 附 注 】 1. 血常规包括白细胞计数及分类、红细胞计数、血红蛋白浓度、红细胞比积、血小板计数 等项目。这些项目亦有相应的手工方法，详见有关资料。 2. 半自动及全自动血液细胞分析仪从设计上均要求用抗凝静脉血。其优点为： （1）静脉血能正确地反映病人实际情况，重复性好； （2）利于延长仪器的使用寿命； （3）解决了采血盘的交叉感染问题等。 3. 血细胞计数应用EDTA·K2：为抗凝剂（EDTA·K2·2 H2O 1.5～2.2mg可抗凝1ml血）。 4. 贮血容器应选用有盖塑料管。抗凝血采集后在室温中贮存应不超过6h；如需制作血涂片 应在2h内完成。 5. 测定前必须将EDTA·K2抗凝血充分混匀。 6. 血细胞分析仪测定最适温度为18～22℃，低于15℃或高于30℃，均可使细胞体积发生改变， 影响各参数的结果。 7. 血细胞分析仪用于白细胞分类只能当作一种过筛手段，当白细胞、红细胞、血红蛋白和 血小板的任何一项有明显 升高或降低；白细胞分类出现异常结果（中间细胞群百分率≥8.0%）；红细胞、白细胞和 血小板的任何一个直方图出现异常图形等情况，须用显微镜检查及分类。 嗜酸性粒细胞直接计数 【 标 本 】 末梢血或抗凝静脉血。 【 方 法 】 直接计数法。 【 试 剂 】 1. Hinkelmann液； 2. 乙醇- 伊红稀释液； 3. 伊红- 丙酮稀释液。 【 操 作 】 1．小试管中加稀释液0.38ml。 2．常法取末梢血20ul，加入管内混匀，待红细胞溶解后两侧充池。 3．静置3～5min ，用低倍镜（必要时用高倍镜）镜下计数10个大方格内嗜酸性粒细胞数 。总数×20×106=嗜酸性粒细胞/L。 【 附 注 】 1. 血液稀释后应于1 h 内计数完毕。 2. 充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛。 3. 住院病人采集标本时间力求统一，以免受日间生理变化的影响。 红细胞沉降率测定 【 标 本 】 抗凝静脉血。 【 方 法 】 魏氏法。 【 试 剂 】 109mmol/L枸橼酸钠溶液。 【 操 作 】 1. 3mm×100mm试管1支，在2ml容量处刻上记号，加抗凝剂0.4ml。 2. 静脉采血后，取下针头，加血至刻度，旋转混合。 3. 用血沉管（300mm×2.5mm）吸取上述混匀血液至" 0 " 刻度处，拭去管外附着的血液，将 管垂直立在血沉架上。 4. 记时，室温中静置1h，观察血浆高度，以红细胞下沉的毫米数报告之。 【 附 注 】 1. 红细胞在单位时间内下沉的速度与血浆蛋白的量与质，血浆中脂类的量和质，红细胞的 大小与数量，是否成串钱相聚以及血沉管的内径、清洁度、放置位置是否垂直，室温高 低等因素都有关系。 2. 标本采集时应空腹。 3. 血液和抗凝剂的比例要准确。 4. 血沉管内径要标准（2.5mm），放置要垂直。 5. 做血沉的标本要在采集后3h 内测定，并充分混匀。 6. 室温过低、过高和贫血时，对结果有影响。为此，血沉应尽量放在18～25℃室温下测定。 室温过高时血沉加快，可以按温度系数校正。室温过低时血沉减慢，无法校正。 网织红细胞计数 【 标 本 】 末梢血或抗凝静脉血。 【 方 法 】 百分计数法。 【 试 剂 】 10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液或10g/L煌焦油蓝ACD溶液。 【 操 作 】 1. 于小试管中滴加1滴煌焦油蓝生理盐水溶液或煌焦油蓝ACD溶液。 2. 加入末梢血或静脉血2 滴于上述试管中，混匀。 3. 静置15～20min 后，取用1 滴制成薄片。 4. 油镜下检查1000个红细胞中网织红细胞数，以百分率或绝对值报告。 【 附 注 】 1. 活体染色时间不能过短，室温低时，放37℃温箱。 2. 网织红细胞也可用Miller窥盘计数法、荧光染色或流式细胞仪计数。 嗜碱性点彩红细胞计数 【 标 本 】 末梢血。 【 方 法 】 百分计数法。 【 试 剂 】 1. 甲醇； 2. 碱性亚甲基蓝染液（保存2～3周）。 【 操 作 】 1. 按常法制成薄血片，自然干燥后，用甲醇固定3min。 2. 用碱性亚甲基蓝染液染色1～2min，水洗待干。 3. 用油镜计数1000个红细胞中嗜碱性点彩红细胞数，以百分率报告。 【 附 注 】 1. 用碱性亚甲基蓝染液染色后，红细胞呈浅蓝绿色，嗜碱性点彩呈深蓝色。 2. 也可用瑞氏染色，嗜碱性点彩呈蓝黑色。 3. 由于点彩红细胞分布不匀，必要时扩大计数红细胞数。 红斑狼疮细胞检查 【 标 本 】 静脉血。 【 方 法 】 改良血块法。 【 操 作 】 1. 抽取患者血液2～3ml ，注于干燥试管内，于室温待凝。 2. 于凝固刚形成时，用竹签将凝块搅碎，并将残余凝块除去。 3. 以2000r/分钟离心沉淀10分钟 ，使白细胞聚集在同一层面，以利于狼疮细胞形成。 4. 置37℃温箱内温育2h。 5. 取出白细胞层及其上下各少许，置红细胞比积管中，以2000r/分钟离心，沉淀10分钟。 6. 吸去上层液，轻轻吸取白细胞层，制成薄片3～4张。 7. 以瑞氏染液染色、镜检。 【 附 注 】 1. 整个操作时间不能超过3h。 2. 注意与果馅细胞鉴别。 一氧化碳血红蛋白定性试验 【 标 本 】 末梢血。 【 试 剂 】 50g/L NaOH。 【 操 作 】 1. 取试管2支，各加蒸馏水3～5ml，一管加患者血液三滴，另一管加正常人对照血3滴，混 匀。此时，如患者血中有一氧化碳，则血液呈樱桃红色。 2. 每管各加50g/L NaOH1滴，轻轻混合，正常对照管呈绿褐色，如患者血液中有一氧化碳血红蛋白，则溶血 液仍呈樱桃红色，为阳性；如与正常对照色泽一致为阴性。 【 附 注 】 1. 观察结果须及时，否则樱桃红色逐渐退去，不易分辨。 2. 本试验敏感性较差，血液中一氧化碳含量到一定程度时才显阳性。如患者事先已采取通 气措施，血中一氧化碳含量下降，试验可阴性。但临床症状、体征仍可能存在。 （ 徐宝贵 朱 炎 ） 第二节 体液及排泄物检查 尿液检验 尿常规检查 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 方 法 】 化学试带法。 【 试 剂 】 各型号尿液化学分析仪配套试带。 【 操 作 】 详见自己实验室的尿液化学分析仪使用手册。 【 附 注 】 1. 尿常规检查使用尿液化学分析仪，目前能进行8～10项检测（PH、蛋白、葡萄糖、酮体、 隐血、尿胆红素、尿胆素原、亚硝酸盐、比重、白细胞）。这些项目亦有相应的手工方 法，详见有关资料。 2. 必须了解所用试带各膜块注意事项、药物干扰。 3. 要注意尿液化学分析仪测定结果与手工法的差异，必要时用手工法复查。 4. 尿液化学分析仪检测仅是一个过筛手段，当蛋白、隐血、白细胞等出现异常结果（如尿 蛋白“＋”或以上）时，应进行镜检。 5. 尿液颜色、透明度等一般性状异常时也应报告。 本－周氏（Bence-Jones）蛋白定性检查 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 方 法 】 热沉淀反应法。 【 试 剂 】 1. 200g/L磺基水杨酸溶液； 2. 2mol/L醋酸盐缓冲溶液（pH4.9±0.1）。 【 操 作 】 1. 先将尿液用磺基水杨酸法作蛋白定性检查，如呈阴性反应，则可认为尿液标本中本－周 氏蛋白阴性。 2. 取透明尿液4ml于试管中，再加入醋酸盐缓冲液1ml，混匀后，放置56℃水浴中15分钟。如 有浑浊或出现沉淀，再将试管放入沸水中，煮沸3分钟，观察试管中浑浊或沉淀的变化， 如浑浊变清、浑浊减弱或沉淀减少，均提示本- 周氏蛋白阳性。若煮沸后，浑浊增加或沉淀增多，表明此尿液中还有其它蛋白质，此时 应将试管从沸水中取出，立即过滤。如滤液开始透明，温度下降后浑浊，再煮沸时又透 明，提示本- 周氏蛋白为阳性。 【 附 注 】 1. 过多的本- 周氏蛋白，在90℃以上不易完全溶解，故需与对照管比较，也可将尿液稀释后再测。 2. 煮沸过滤除去尿中白、球蛋白时，动作要迅速，并需保持高温，否则本- 周氏蛋白也会滤去。 肌红蛋白定性试验 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 试 剂 】 1. 10g/L 邻甲联苯胺（о- tolidine）溶液； 2. 过氧化氢醋酸溶液； 3. 硫酸铵粉末。 【 操 作 】 1. 首先测试尿液中有无血红素的存在，即依次加入新鲜尿液4滴，邻甲联苯胺溶液2滴，混 和后，加入过氧化氢醋酸溶液3滴，如有蓝色或蓝绿色出现，表示尿中有Hb或/ 及Mb的存 在。 2. 离心或过滤使尿液透明，吸取5ml，加入硫酸铵粉末2.8g，使之溶解混合，约为80% 饱和 度，静置5 分钟，用滤纸过滤。取滤液重复测试有无血红素存在，如仍有，表示Mb阳性 。如不显蓝色，表示血红素已被硫酸铵沉淀，为Hb阳性。 【 附 注 】 1. 标本必须新鲜，并避免剧烈搅拌。 2. 本法为过筛试验，在少数正常人中可出现假阳性。 尿含铁血黄素定性试验 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 方 法 】 罗斯（Rous）法 【 试 剂 】 1．20g/L亚铁氰化钾水溶液（用时新鲜配制）； 2．3 %盐酸。 【 操 作 】 1. 取混匀的新鲜尿液15ml，以2000r/min离心5min，倾去上清液。 2. 在沉渣中加入新鲜配制的20g/L亚铁氰化钾水溶液及3%盐酸液各2ml，充分混匀，室温静 置10min。 3. 再离心沉淀，取沉淀物涂片，加盖玻片后用高倍镜（必要时用油镜）检查。 4. 如见有分散或成堆蓝色闪光颗粒（直径1～3um）即为阳性，如在细胞内则更为可信。 【 附 注 】 1. 所有试管、玻片、试剂均应防止铁剂污染，以免出现假阳性。 2. 一般应做阴性对照，如亚铁氰化钾与盐酸混和后即显深蓝色，表示试剂已污染高铁，不 宜再用。 尿乳糜定性检查 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 试 剂 】 1. 乙醚（AR）； 2. 苏丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩红染色液。 【 操 作 】 1. 取尿5～10ml，加乙醚2～3ml，混合振摇后，使脂肪溶于乙醚。静置数分钟后，2000r/m in离心5min。 2. 吸取乙醚与尿液的界面层涂片，加苏丹Ⅲ醋酸乙醇染色液或猩红染色液1滴。 3. 镜检观察是否有红色脂肪小滴。 【 附 注 】 1. 尿液中加少量饱和氢氧化钠，再加乙醚，有助于澄清。 2. 将分离的乙醚层隔水蒸干，若留有油状沉淀，也可加苏丹Ⅲ，镜检证实有无脂肪小滴。 尿胆色素原定性试验 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 试 剂 】 1. 对二甲氨基苯甲醛试剂； 2. 饱和醋酸钠溶液； 3. 氯仿； 4. 正丁醇。 【 操 作 】 1. 在试管中，加入尿标本2ml及对二甲氨基苯甲醛试剂2ml，混合。 2. 立即加饱和醋酸钠溶液4ml，混合，加氯仿3ml，振摇混合后，上层水溶液呈红色者为阳 性反应。 3. 阳性结果应用下法证实：如尿胆原含量多，用一次氯仿不能完全抽提尿胆原，应多次用 氯仿抽提，直至氯仿层呈淡粉红色或无色为止，再观察上层水溶液色泽。如上层水溶液 为红色时，再加正丁醇4ml抽提，如水溶液仍呈红色则证实尿中胆色素元为阳性。 【 附 注 】 1. 醋酸钠溶液必须为饱和液。 2. 当尿胆色素原浓度太高时，应将尿标本稀释25～100倍。 3. 尿液必须新鲜，不能久置。 尿苯丙酮酸定性试验 【 标 本 】 新鲜尿液。 【 方 法 】 三氯化铁法。 【 试 剂 】 1. 100g/L三氯化铁液； 2. 磷酸盐沉淀剂。 【 操 作 】 1. 尿液4ml加磷酸盐沉淀剂1ml，混匀，静置3min，如出现沉淀，可用滤纸过滤或离心除去 。 2. 滤液中加入浓盐酸2～3滴和100g/L三氯化铁溶液2～3滴，每加1滴立即观察颜色变化。以 尿液显蓝绿色并持续2~4min，为阳性。 【 附 注 】 1. 尿中若含酚类药物（如水杨酸制剂）及氯丙嗪，也可与氯化铁结合显色，试验前应停用 此类药物。胆红素也可造成假阳性。 2. 小儿出生后6 周内不易查出。故于出生6 周后检查为宜。 3. 大多数苯丙酮尿症患者的尿液可出现阳性。但约1/4～1/2病例可能会漏检 4. 亦可采用2，4-二硝基苯肼法。 尿沉渣检查 【 标 本 】 新鲜尿液（最好采集清晨中段尿）。 【 方 法 】 显微镜检查法。 【 操 作 】 1. 取刻度离心管，倒入混合后的新鲜尿液10ml，1500r/ min 离心5min。 2. 弃去上层清液，留下0.2ml沉渣，轻摇离心管，使尿沉渣有形成分充分混匀。 3. 取尿沉渣0.02ml，滴在载玻片上，用18mm×18mm的盖玻片覆盖。 4. 镜检观察，用10×10 镜头，观察其中有形成分的全貌及管型。用10×40 镜头观察鉴定细 胞成分及计算数量，应观察10个视野所见最低和最高值，记录结果。管型用高倍镜鉴定 ，但计数数量按低倍镜观察20个视野，算出一个视野的平均值，记录结果。尿结晶和盐 类数量以每一高倍视野＋、2＋、3＋、4＋报告。 【 附 注 】 1. 清晨空腹第一次尿（一般情况应采集中段尿），应在1h内送检。 2. 见到各种上皮细胞也应报告，报告方式参照白细胞。 3. 亦可采用染色尿沉渣镜检。 尿沉渣定量检查 【 标 本 】 新...
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